Het jaar is 1476 en graaf Dracula is begonnen Europa te verwoesten met een leger monsters. De Belmont-familie van vampierjagers, ooit verbannen uit Walachije, wordt door de kerk in actie gebracht. Ze vreesden de ‘supermenselijke’ macht van de Belmont, maar met Dracula dreigend om Europa in duisternis te slikken, hebben ze geen andere keus dan Trevor Belmont, de huidige wielder van de Vampire Killer Whip, te noemen.
Deelnemen aan Trevor Belmont in zijn missie om Dracula te verslaan zijn drie nieuwe speelbare personages: Sypha Belnades, een jonge tovenares met een slechte fysieke aanvalskracht, maar krachtige elementaire magische spreuken tot haar beschikking; Grant Danasty, een piraat met de mogelijkheid om op muren te klimmen en in het midden van de sprong van richting te veranderen (een zeldzaam vermogen in eerdere games van de serie); en Alucard, de zoon van Dracula, een dhampir met de vaardigheid om vuurballen te schieten en te transformeren in een vleermuis. Trevor kan worden vergezeld door slechts één metgezel tegelijk. Als hij ervoor kiest om het tegen een ander op te nemen, moet hij zijn huidige metgezel verlaten. De speler kan “spiritueel transformeren” tussen Trevor en zijn bondgenoot met de “select” -knop. Zowel Trevor als degene die hem vergezelt, delen dezelfde gezondheidsmeter. Het einde van het spel verschilt afhankelijk van welke partner Trevor op dat moment bij hem heeft, of dat hij helemaal geen ander personage bij zich heeft. Het einde bepaalt het pad van het personage naar Valhalla.
